蛋白質的沉淀反應
一、目的和要求
1、加深對蛋白質膠體溶液穩定因素的認識
2、掌握幾種沉淀蛋白質的方法
3、了解蛋白質變性與沉淀的關系
二、沉淀反應
（一）原理
在水溶液中，蛋白質分子的表面上由于有水化層和同性電荷的作用，所以成為穩定的膠體顆粒。但這種穩定的狀態是有條件的。在某些理化因素的作用下，蛋白質分子表面帶電性質發生變化、脫水甚至變性，則會以固態形式從溶液中析出，這個過程就稱為蛋白質的沉淀反應。蛋白質的沉淀反應可分為以下兩種類型：
1、可逆沉淀反應
沉淀反應發生后，蛋白質分子內部結構并沒有發生大的或者顯著變化。在沉淀因素去除后，又可恢復其親水性，這種沉淀反應就是可逆沉淀反應，也叫做不變性沉淀反應。屬于這類沉淀反應的有鹽析作用、等電點沉淀以及在低溫下短時間的有機溶劑沉淀法等。
2、不可逆沉淀反應
蛋白質在沉淀的同時，其空間結構發生大的改變，許多副鍵發生斷裂，即使除去沉淀因素，蛋白質也不會恢復其親水性，并喪失生物活性，這種沉淀反應就是不可逆沉淀反應。重金屬鹽、生物堿試劑、強酸、強堿、加熱、強烈震蕩、有機溶劑等都能使蛋白質發生不可逆沉淀反應。
（二）鹽析
1、材料與試劑
（1）10%的卵清蛋白溶液（要求新鮮配制）、濃蛋白溶液（2）飽和硫酸銨溶液 （3）固體硫酸銨 （4）濾紙、玻棒
2、操作方法
（1）取試管一支，加入濃蛋白溶液2ml，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置10分鐘將出現沉淀。此沉淀物為球蛋白。
（2）取上清液于另一支試管。
（3）向上清液液中加入硫酸銨粉末，邊加邊用玻棒攪拌，直至粉末不再溶解為止。靜置數分鐘后，沉淀析出的是清蛋白。
（4）向兩支試管中分別加水，觀察其沉淀是否溶解。
（三）重金屬鹽沉淀
重金屬離子如Pb2+、Cu2+、Hg2+、Ag2+ 等可與蛋白質分子上的羥基結合生成不溶性金屬鹽而沉淀： +3
Pr
--2+-PrNH
2
重金屬鹽類沉淀蛋白質的反應通常很完全，特別是在堿金屬鹽類存在時。因此，生化分析中，常用重金屬鹽除去體液中的蛋白質；臨床上用蛋白質解除重金屬鹽引起的食物中毒。
1、材料與試劑
（1）10%的卵清蛋白溶液（2）0.1mol/L氫氧化鈉溶液
（3）3%硝酸銀溶液 （4）0.1%硫酸銅溶液 （6）試管3支
2、操作方法
（1）取試管2支，分別編號后各加入1ml 10%的卵清蛋白溶液。
（2）各管再加入一滴0.1mol/L氫氧化鈉溶液。
（3）向1管加3%硝酸銀溶液3～4滴；向2管加0.1%硫酸銅溶液3～4滴�；靹蚝笥^察沉淀的生成。
（四）生物堿試劑沉淀反應 生物堿試劑能與蛋白質分子中的氨基結合生成不溶性沉淀，反應如下： NH+3
-
1、材料與試劑 PrNH
3.OOCCCl3 +
（1）10%的卵清蛋白溶液 （2）5%三氯乙酸溶液
2、操作方法
取試管一支，加10%的卵清蛋白溶液20滴后再加入5%三氯乙酸溶液10滴，混勻后觀察沉淀的出現。
（五）有機溶劑沉淀反應
1、材料與試劑
（1）10%的卵清蛋白溶液 （2）95%乙醇溶液
2、操作方法
取試管1支，加10%的卵清蛋白溶液10滴后，再加入95%乙醇溶液20滴，邊加邊混勻。靜置片刻后觀察結果。
習 題
1、鹽析時為什么分別用飽和硫酸銨溶液和硫酸銨粉末？
2、重金屬鹽沉淀蛋白質注意什么？
第二篇：蛋白質的沉淀反應（附圖）
┣ 實驗二報告 2200字
┣ 蛋白質等電點測定和沉淀反應思考題 400字
┣ 沉淀反應 3100字
┣ 蛋白質性質實驗 700字
┣ 更多蛋白質的沉淀反應實驗報告