雙縮脲反應
(一)、實驗原理
尿素加熱至180℃左右,生成雙縮脲并放出一分子氨。雙縮脲在堿性環境中能與Cu2+結合生成紫紅色化合物,此反應稱為雙縮脲反應。蛋白質分子中有肽鍵,其結構與雙縮脲相似,也能發生此反應?捎糜诘鞍踪|的定性或定量測定。
雙縮脲反應不僅為含有兩個以上肽鍵的物質所有。含有一個肽鍵和一個—CS—NH2,—CH2—NH2,—CRH—NH2,—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基團的物質以及乙二酰二胺(O=C——C=O)等物質也有此反應。NH3也干擾此反應,因為NH-3與Cu-2+可生成暗藍色的絡離子Cu(NH3)42+。因此,一切蛋白質或二肽以上的多肽都有雙縮脲反應,但有雙縮脲反應的物質不一定都是蛋白質或多肽。
茚三酮反應
(一)、實驗原理
除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應產生黃色物質外,所有α—氨基酸及一切蛋白質都能和茚三酮反應生成藍紫色物質。
β—丙氨酸、氨和許多一級胺都呈陽性反應。尿素、馬尿酸、二酮吡唪和肽鍵上的亞氨基不呈現此反應。因此,雖然蛋白質和氨基酸均有茚三酮反應,但能與茚三酮呈陽性反應的不一定就是蛋白質或氨基酸。在定性、定量測定中,應嚴防干擾物存在。
該反應十分靈敏,1∶1 500 000濃度的氨基酸水溶液即能給出反應,是一種常用的氨基酸定量測定方法。
茚三酮反應分為兩步,第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛,水合茚三酮被還原成還原型茚三酮;第二步是所形成的還原型茚三酮同另一個水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質。
此反應的適宜pH為5~7,同一濃度的蛋白質或氨基酸在不同pH條件下的顏色深淺不同,酸度過大時甚至不顯色。
黃色反應
(一)、實驗原理
含有苯環結構的氨基酸,如酪氨酸和色氨酸,遇硝酸后,可被硝化成黃色物質,該化合物在堿性溶液中進一步形成橙黃色的硝醌酸鈉。
多數蛋白質分子含有帶苯環的氨基酸,所以有黃色反應,苯丙氨酸不易硝化,需加入少量濃硫酸才有黃色反應。
…… …… 余下全文