糖類的性質實驗（一）糖類的顏色反應

一、目的

1．了解糖類某些顏色反應的原理。

2．學習應用糖的顏色反應鑒別糖類的方法。

二、顏色反應

（一）α-萘酚反應（Molisch反應）。

1．原理 糖在濃無機酸（硫酸、鹽酸）作用下，脫水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能與α-萘酚生成紫紅色物質。因為糠醛及糠醛衍生物對此反應均呈陽性，故此反應不是糖類的特異反應。

2．器材

（1）試管及試管架（2）滴管

3．試劑

（1）莫氏（ Molisch）試劑： 5％ α-萘酚的酒精溶液1500mL稱取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，總體

積達100mL，貯于棕色瓶內。用前配制。

（2）1％葡萄糖溶液 100mL

（3）1％果糖溶液 100mL

（4）1％蔗糖溶液 100mL

（5）1％淀粉溶液 100mL

（6）0.1％糠醛溶液 100mL

（7）濃硫酸 500mL

4．操作

取5支試管，分別加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、

1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、 0.1％糠醛溶液各 1mL。再向5支試管中各加入2滴莫氏試劑，充分混合。斜執試管，沿管壁慢慢加入濃硫酸約1mL，慢慢立起試管，切勿搖動。濃硫酸在試液下形成兩層。在二液分界處有紫紅色環出現。觀察、記錄各管顏色。

（二）間苯二酚反應（Seliwanoff反應）

1．原理

在酸作用下，酮糖脫水生成羥甲基糠醛，后者再與間苯二酚作用生成紅色物質。此反應是酮糖的特異反應。醛糖在同樣條件下呈色反應緩慢，只有在糖濃度較高或煮沸時間較長時，才呈微弱的陽性反應。在實驗條件下蔗糖有可能水解而呈陽性反應。

2．器材

（1）試管及試管架

（2）滴管

（3）水浴鍋

3．試劑

（1）塞氏（Seliwanoff）試劑 0.05％間苯二酚-鹽酸溶液

1000 mL

稱取間苯二酚0.05 g溶于30 mL濃鹽酸中，再用蒸餾水稀釋至100 mL

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高中生物學實驗的各種顏色反應總結

1、斐林試劑（或班氏試劑）檢測可溶性還原糖

原理：還原糖+斐林試劑（或班氏試劑）→磚紅色沉淀

常見還原糖：葡萄糖、果糖、麥芽糖

注意：斐林試劑的甲液和乙液要等量混合均勻后方可使用，而且是現用現配，條件需要水浴加熱。

應用：檢驗和檢測某糖是否為還原糖;不同生物組織中含糖量高低的測定;在醫學上進行疾病的診斷，如

糖尿病、腎炎。

2、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ檢測脂肪

原理：蘇丹Ⅲ+脂肪→橘黃色;

蘇丹Ⅳ+脂肪→紅色

注意：脂肪的鑒定需要用顯微鏡觀察。

應用：檢測食品中營養成分是否含有脂肪。

3、雙縮脲試劑檢測蛋白質

原理：蛋白質+雙縮脲試劑→紫色

注意：雙縮脲試劑在使用時，先加A液再加B液，反應條件為常溫(不需要加熱)。 應用：鑒定某些消化液中含有蛋白質;用于劣質奶粉的鑒定。

4、碘液檢測淀粉

原理：淀粉+碘液→藍色

注意：這里的碘是單質碘，而不是離子碘。

應用：檢測食品中營養成分是否含有淀粉

5、DNA的染色與鑒定

染色原理：DNA+甲基綠→綠色

應用：可以顯示DNA在細胞中的分布。

鑒定原理：DNA+二苯胺→藍色

條件：沸水浴

應用：用于DNA粗提取實驗的鑒定試劑。

6、吡羅紅使RNA呈現紅色

原理：RNA+吡羅紅→紅色

應用：可以顯示RNA在細胞中的分布。

注意：在觀察DNA和RNA在細胞中的分布時用的是甲基綠和吡羅紅混合染色劑，而不是

單獨染色。

7、臺盼藍使死細胞染成藍色

原理：正常的活細胞，細胞膜結構完整具有選擇透過性能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進 入胞內;死細胞或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。 應用：區分活細胞和死細胞;檢測細胞膜的完整性。

8、線粒體的染色

原理：健那綠染液是專一性染線粒體的活細胞染料，可以使活細胞中的線粒體呈現藍綠 色，而細胞質接近無色。

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高中生物學實驗的各種顏色反應總結

1、斐林試劑（或班氏試劑）檢測可溶性還原糖

原理：還原糖+斐林試劑（或班氏試劑）→磚紅色沉淀

常見還原糖：葡萄糖、果糖、麥芽糖

注意：斐林試劑的甲液和乙液要等量混合均勻后方可使用，而且是現用現配，條件需要水浴加熱。

應用：檢驗和檢測某糖是否為還原糖;不同生物組織中含糖量高低的測定;在醫學上進行疾病的診斷，如

糖尿病、腎炎。

2、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ檢測脂肪

原理：蘇丹Ⅲ+脂肪→橘黃色;

蘇丹Ⅳ+脂肪→紅色

注意：脂肪的鑒定需要用顯微鏡觀察。

應用：檢測食品中營養成分是否含有脂肪。

3、雙縮脲試劑檢測蛋白質

原理：蛋白質+雙縮脲試劑→紫色

注意：雙縮脲試劑在使用時，先加A液再加B液，反應條件為常溫(不需要加熱)。 應用：鑒定某些消化液中含有蛋白質;用于劣質奶粉的鑒定。

4、碘液檢測淀粉

原理：淀粉+碘液→藍色

注意：這里的碘是單質碘，而不是離子碘。

應用：檢測食品中營養成分是否含有淀粉

5、DNA的染色與鑒定

染色原理：DNA+甲基綠→綠色

應用：可以顯示DNA在細胞中的分布。

鑒定原理：DNA+二苯胺→藍色

條件：沸水浴

應用：用于DNA粗提取實驗的鑒定試劑。

6、吡羅紅使RNA呈現紅色

原理：RNA+吡羅紅→紅色

應用：可以顯示RNA在細胞中的分布。

注意：在觀察DNA和RNA在細胞中的分布時用的是甲基綠和吡羅紅混合染色劑，而不是單獨染色。

8、線粒體的染色

原理：健那綠染液是專一性染線粒體的活細胞染料，可以使活細胞中的線粒體呈現藍綠

色，而細胞質接近無色。

應用：可以用高倍鏡觀察細胞中線粒體的存在。

9、酒精的檢測

原理：橙色的重鉻酸鉀溶液在酸性條件下與酒精發生化學反應，變成灰綠色。

應用：探究酵母菌細胞呼吸的方式;制作果酒時檢驗是否產生了酒精;檢查司機是否酒后 駕駛。

10、CO2的檢測

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高中生物學實驗的各種顏色反應總結 1斐林試劑檢測可溶性還原糖

原理：還原糖+斐林試劑→磚紅色沉淀

注意：斐林試劑的甲液和乙液要等量混合均勻后方可使用，而且是現用現配，條件需要水浴加熱。

應用：檢驗和檢測某糖是否為還原糖;不同生物組織中含糖量高低的測定;在醫學上進行疾病的診斷，如糖尿病、腎炎。

2蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ檢測脂肪

原理：蘇丹Ⅲ+脂肪→橘黃色;蘇丹Ⅳ+脂肪→紅色

注意：脂肪的鑒定需要用顯微鏡觀察。

應用：檢測食品中營養成分是否含有脂肪。

3雙縮脲試劑檢測蛋白質

原理：蛋白質+雙縮脲試劑→紫色

注意：雙縮脲試劑在使用時，先加A液再加B液，反應條件為常溫(不需要加熱)。 應用：鑒定某些消化液中含有蛋白質;用于劣質奶粉的鑒定。 4碘液檢測淀粉

原理：淀粉+碘液→藍色

注意：這里的碘是單質碘，而不是離子碘。

應用：檢測食品中營養成分是否含有淀粉

5DNA的染色與鑒定

染色原理：DNA+甲基綠→綠色

應用：可以顯示DNA在細胞中的分布。

鑒定原理：DNA+二苯胺→藍色

應用：用于DNA粗提取實驗的鑒定試劑。 6吡羅紅使RNA呈現紅色 原理：RNA+吡羅紅→紅色 應用：可以顯示RNA在細胞中的分布。

注意：在觀察DNA和RNA在細胞中的分布時用的是甲基綠和吡羅紅混合染色劑，而不是單獨染色。

7臺盼藍使死細胞染成藍色

原理：正常的活細胞，細胞膜結構完整具有選擇透過性能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內;死細胞或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。 應用：區分活細胞和死細胞;檢測細胞膜的完整性。

8線粒體的染色

原理：健那綠染液是專一性染線粒體的活細胞染料，可以使活細胞中的線粒體呈現藍綠色，而細胞質接近無色。

應用：可以用高倍鏡觀察細胞中線粒體的存在。

9酒精的檢測

原理：橙色的重鉻酸鉀溶液在酸性條件下與酒精發生化學反應，變成灰綠色。 應用：探究酵母菌細胞呼吸的方式;制作果酒時檢驗是否產生了酒精;檢查司機是否酒后駕駛。

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細菌的生理生化反應實驗報告

【實驗目的】

了解細菌生理生化反應原理，掌握細菌鑒定中常見的生理生化反應方法。 了解生理生化反應在鑒別細菌中的意義。

【實驗原理】

通過測定微生物校內某些酶類的有無、對某些第五的利用能力、代謝產物的類型等來研究微生物帶血的多樣性。某些細菌產生色氨酸酶，能分解培養基蛋白胨中的色氨酸，產生吲哚，吲哚與對二甲基氨基苯甲醛發生反應，形成紅色的玫瑰吲哚，為吲哚反應陽性。 微生物發酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸縮合脫羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在堿性條件下與肌酸類物質反應，生成紅色化合物為V.P.反應陽性。有些細菌發酵糖類產生有機酸較多，使發酵液的pH下降到4.2以下，當加入甲基紅試劑后，時發酵液變紅色，為甲基紅反應陽性。某種微生物能以某種糖類為碳源，產酸產氣，則判斷為發酵這種糖。

【實驗材料和用具】

1. 菌種：大腸桿菌、產氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌。

2. 培養基：葡萄糖蛋白胨水培養基、蛋白胨水培養基、糖發酵培養基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P試劑、甲基紅試劑、吲哚試劑

3. 儀器：酒精燈、接種環、超凈工作臺、恒溫培養箱、高壓滅菌鍋、試管、移液槍、滴管、杜氏小管。

【實驗方法】

（一）V-P反應

1.試管標記 取5只裝有葡萄糖蛋白胨水培養基的試管，分別標記大腸桿菌、產氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對照。

2.接種培養 以無菌操作分別接種少量菌苔至上述相應試管的培養基中�？瞻讓φ詹唤臃N。置37度恒溫培養箱中培養24-48h。

3.觀察記錄 去除以上培養物，分別取出2ml培養液加入另外5支相應編號的空試管中，加入與培養液等量的V-P試劑，充分震蕩2min。放置37度恒溫培養箱中培養30min觀察記錄結果。

（二）甲基紅實驗

于V-P實驗留下的培養液中，分別加入2-3滴甲基紅指示劑，立即觀察培養液的顏色變化

（三）吲哚實驗

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實驗三 聚合酶鏈式反應（PCR）以及瓊脂糖凝膠電泳 實驗目的

1.掌握PCR反應的原理及各反應成分的作用；

2.熟悉PCR反應程序的設計規則；

3.掌握引物的設計原則及其與PCR其他成分的配制方法；

4.掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理及其應用范圍；

5.熟悉瓊脂糖凝膠電泳相關緩沖液的配制方法。

實驗原理

一．聚合酶鏈式反應原理

在已知待擴增模板全部或部分序列的情況下，依據DNA半保留復制的機理，在含有Mg2+的緩沖溶液中，采用耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在特異性引物（分為上游和下游引物）的引導下，通過dNTP為原料，以cDNA或DNA等為模板，在人為控制DNA合成系統（PCR儀）溫度調節下，通過變性（95℃）、退火（50-60℃ ）及延伸（ 72℃ ）等3個步驟的循環進行（30-35循環），在體外進行雙鏈DNA變性為單鏈，單鏈DNA與特異性引物退火形成局部雙鏈，進而在DNA聚合酶的作用下使引物沿相應模板延伸為特異性引物所限定范圍的大量雙鏈DNA的體外合成反應。

本質為體外DNA合成的酶反應。

二．瓊脂糖凝膠電泳反應原理

瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，可以形成具有剛性的濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。在一定電場強度下偏堿性的緩沖液中（TAE pH8.0或TBE pH7.5-7.8），DNA分子帶負電，其遷移速度取決于分子篩效應，在電荷效應與分子篩效應作用下，具有不同的相對分子量及構型的DNA片段泳動速度不同。DNA 分子的遷移速度與相對分子質量的對數值成反比關系。

凝膠電泳不僅可分離不同分子量的DNA，也可以分離分子量相同，但構型不同的DNA分子。如質粒的三種構型的泳動速率不同：超螺旋閉合環狀質粒最快，線型質粒其次，開環質粒最慢。

實驗步驟

（一）PCR 加樣術式

在一微量離心管中依次加入下列試劑：

水煮裂解后的細菌液 4?L

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實驗1 糖的呈色反應和還原糖的檢驗

一、實驗目的

1.學習鑒定糖類及區分酮糖和醛糖的方法。

2.了解鑒定還原糖的方法及其原理。

二、實驗原理

糖經濃無機酸處理，脫水產生糠醛或糠醛衍生物。戊糖形成糠醛，己糖則形成羥甲基糠醛。

這些糠醛和糖醛衍生物在濃無機酸作用下，能與酚類化合物縮合生成有色物質。與一元 酚如α一萘酚作用，形成三芳香環甲基有色物質。與多元酚如間苯二酚作用，則形成氧雜蒽有色物質，反應式如下：

通常使用的無機酸為硫酸。如用鹽酸，則必須加熱。常用的酚類為α一萘酚、甲基苯二酚、間苯二酚和間苯三酚等，有時也用芳香胺、膽酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶類化合物等。

有人認為，用濃硫酸作為脫水劑時，形成有顏色的產物與酚核的磺化有關，見如下反應式；

1

（一）糖的呈色反應

1．Molish反應(α～萘酚反應)

本實驗是鑒定糖類最常用的顏色反應。糖在濃酸作用下形成的糠醛及其衍生物與α一萘酚作用，形成紅紫色復合物。在糖溶液與濃硫酸兩液面間出現紫環，因此又稱紫環反應。自由存在和結合存在的糖均呈陽性反應。此外，各種糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈顏色近似的陽性反應。因此，陰性反應證明沒有糖類物質的存在；而陽性反應，則說明有糖存在的可能性，需要進一步通過其他糖的定性試驗才能確定有糖的存在。

2．蒽酮反應

糖經濃酸水解，脫水生成的糠醛及其衍生物與蒽酮(10一酮一9，10一二氫蒽)反應生成藍一綠色復合物。

3. Seliwanoff反應(間苯二酚反應)

該反應是鑒定酮糖的特殊反應。在酸作用下，己酮糖脫水生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚結合生成鮮紅色的化合物，反應迅速，僅需20—30s。在同樣條件下，醛糖形成羥甲基糠醛較慢。只有糖濃度較高時或需要較長時間的煮沸，才給出微弱的陽性反應。蔗糖被鹽酸水解生成的果糖也能給出陽性反應。

4．Bial反應(甲基間苯二酚反應)

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